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如何选择适合的AAV

第一步:选择您需要的AAV血清型

现有从自然界发现或人工创建的100多种AAV血清型和他们的变体。AAV不同的血清型,主要区别是衣壳蛋白不同,因此针对不同组织器官的转染效率存在差距。派真生物可提供AAV包装中使用到的多种血清型供客户选择,建议研究者针对自己的实验组织选择合适的血清型。
迄今为止,AAV9,AAVrh10,还有最近兴起的AAVPHP.B都是系统注射或希望透过血脑屏障的理想选择(数据主要来源于鼠类动物实验,AAVPHP.B尚未在非人类灵长类动物中进行实验)。AAVDJ则在大部分细胞系中展现出广泛和高效力的感染性,能感染超过80%的常规培养细胞,因此成为体外实验的最佳选择。AAV6对血液来源和其他种类细胞感染力最强。
值得注意的是,AAV作为一种病毒载体,注射部位如何选择,应注射多少病毒,注射后多久检测等问题,都因研究领域、研究动物的不同而很难有简单广泛的通用方案。具体的实验细节还需要研究团体具体摸索。目前对灵长类不同AAV血清型的研究还不完善,文献报道各组织的AAV血清感染能力存在一定差异,建议研究者通过预实验确定理想的血清型,这也是实验的创新亮点之一。
请参考下表1表2来进行您的实验设计(红色标记表示强烈推荐的选项,但最终主要取决于您的实验设计),当然您也可以联系我们以获得技术咨询。
如有任何问题, 请联系我们免费咨询。

表1,体内实验的AAV选择

表2,AAV体外感染效力

注:感染效力以AAV-2100%标准;ND=无信号。参考文献:Grimm, D. et al. (2008). J. Virol. 82: 5887-5911

第二步:选择适合您实验的载体

我们创立了一套载体定制系统,仅需简单一个克隆步骤即可用于您的实验,包括:CRISPR敲除,CRISPR激活,基因过表达,shRNA敲除系统等:
  • CRISPR-spCas9/saCas9/NmCas9/Cpf1
  • CRISPR-Activation system
  • Gene-Overexpression system
  • shRNA Knock-Down system
  • miRNA-shRNA and other
客户需要提供所需的物种、基因名或基因序列,由派真生物进行载体图谱设计及构建。

表3,基因过表达系统