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常用蛋白标签选择

您也许经常会面临蛋白标签的选择问题,PackGene为您提供蛋白表单的选择参考。
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名称 蛋白标签简介
eGFP/eCFP

/eYFP/mCherry

分别是增强型绿色荧光蛋白(eGFP)、增强型黄绿色荧光蛋白(eCFP)、增强型黄绿色荧光蛋白(eYFP)、单体红色荧光蛋白(mCherry,具有不同的激发波长发射波长为,均由野生型荧光蛋白通过氨基酸突变和密码子优化而来。就eGFP而言,相对于GFP,其荧光强度更强、荧光性质更稳定。同时载体中构建的Kozak序列使得含有eGFP的融合蛋白在真核表达系统中表达效率更高。mCherry是从DsRed演化来的性能最好的一个单体红色荧光蛋白,可以和GFP系列荧光蛋白共用,实现多色标记体内、外实验表明,mCherryN端和C端融合外源蛋白时,荧光蛋白活性和被融合的目标蛋白功能相互没有明显影响。
Renilla-Luc/

Guassia-Luc/

Fire-Luc

来源于生物体内的荧光素,常见的有萤火虫荧光素酶、海肾荧光素酶和Guassia荧光素酶。荧光素酶作为“报告蛋白”用于报告基因检测法或萤光素酶检测法(Luciferase Assay)。跟普通融合蛋白标签不同,使用荧光素酶构建的报告基因可用作目的基因的定量分析。因此常用于研究启动子、miRNA 3’UTR克隆的功能与调控,因为它们对目的基因的调控可以是渐变的,而不是简单的开和关两种状态。
HA HA 标签(氨基酸序列:YPYDVPDYA)是一段来源于人流感病毒血凝素(HA)蛋白第 98106 位氨基酸的短序列,分子量为 1.1 KDa,是目前广泛应用的表位标签之一,能形成强烈的抗体识别位点。 通过分子生物学手段将 HA 标签融合到目的蛋白的 C 端或 N 端后,抗 HA 标签抗体可用于 HA 标记的靶蛋白的检测、分离和纯化,而无需蛋白特异性抗体或探针。
Flag Flag融合标签是由八个氨基酸(DYKDDDDK )组成的短肽,专门设计用于重组蛋白质的免疫吸附纯化。Flag标签结构短小,且与融合蛋白质之间含有一个肠激酶切割位点,可以通过肠激酶切割被除去。
His6 6xHis 标签,也称为多组氨酸标签, His6 标签或 hexa 组氨酸标签, 是一种在转染的细胞中目标蛋白的 C 端或 N 端上由至少 6 个组氨酸残基链接上所组成的氨基酸序列。相对小的分子量,低的免疫原性,亲水性和在去污剂和其他添加剂存在的情况下的易变性, 组氨酸残基的序列可以在特定的缓冲液条件下结合到几种类型固定的离子上(比如镍,钴和铜)从而达到容易检测和纯化 His 标签蛋白的目的。因此在天然和变性的条件下,多组氨酸标签是被公认为最广泛使用的亲和标签用于一系列的蛋白纯化目的。
GST 谷胱甘肽S-转移酶(GST)是最早被使用的表位标签之一; 它可以置于NC端并可以蛋白质的可溶表达。用谷胱甘肽结合树脂进行纯化。
HSV 单纯疱疹病毒(HSV)来源于糖蛋白D前体包膜蛋白并且短(QPELAPEDPED),所以它不太可能干扰蛋白质结构或功能。
MBP 麦芽糖结合蛋白(MBP,标签的大小(43kDa)有助于其增加大肠杆菌中可溶性蛋白质的产量。与GST和硫氧还蛋白一起,它作为促溶标签也十分受欢迎。使用低成本的直链淀粉树脂(标签和蛋白质之间的Asn10 spacer能增强与树脂的结合能力)实现纯化。
c-Myc C-Myc标签蛋白,是一个含11个氨基酸的小标签,标签序列Glu-Gln-Lys-Leu-Ile-Ser-Glu-Glu-Asp-Leu,这11个氨基酸作为抗原表位表达在不同的蛋白质框架中仍可识别其相应抗体。C-Myc tag已成功应用在 Western-blot杂交技术、免疫沉淀和流式细胞计量术中, 可用于检测重组蛋白质在靶细胞中的表达。
T7 这是来自T7噬菌体的基因10产物的260个残基的标签; 可增强大肠杆菌中的表达水平。
Snap SNAP-Tag是从人的O6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移(O6-alkylguanine-DNA-alkyltransferase)获得。SNAP所带的活性巯基位点接受了苯甲基鸟嘌呤所携带的侧链苯甲基基团,释放出了鸟嘌呤。这种新的硫醚键共价结合使SNAP所带的目的蛋白携带上了苯甲基基团所带的标记物。生物素或各种颜色荧光的底物(如荧光素、若丹明)可渗透进入细胞,方便快捷地进行活细胞内SNAP-Tag融合蛋白的标记与检测,它也可特异性地标记大肠杆菌,酵母和哺乳动物等细胞抽提液或已经纯化的蛋白液中的SNAP-tag融合蛋白。
SV40 NLS 核定位序列PKKKRKVPKKKRKVG,分子量为883.13,野生型的氨基酸序列为Pro-Lys-Lys-Lys-Arg-Lys-Val, 即使单个氨基酸突变所产生的突变型NLS(Pro-Lys-Tyr-Lys-Arg-Lys-Val)也能阻止这种蛋白质进入细胞核而停留在细胞质中。
P2A/T2A 2A肽被发现于口蹄疫病毒(FMDV),是从其中鉴定出的一种“自裂解”小肽,其平均长度为18-22个氨基酸。2Apeptide“同时转录,同时翻译”
IRES IRES元件具有不依赖帽子结构而独立募集核糖体的功能,进而可以启动下游基因的翻译。IRES“同时转录,独立翻译”
V5 来源于副粘病毒SV5P / V蛋白的95-108位氨基酸(GKPIPNPLLGLDST),V5 标签常被融合表达于靶蛋白的 N 末端或者 C 末端,以便对靶蛋白进行分析和鉴定。
dTomato 在所有光谱型中,亮度最强的荧光蛋白是串联形式的二聚体Tomato(dimeric Tomato, dTomato)。串联二聚体包含dTomato2各拷贝,由12个氨基酸残基的接头链接。由于有一对发色团,导致dTomato亮度极强并且有得天独厚的光稳定性。dTomato最大的缺点是分子量较大,在某些情况下会干扰融合蛋白的折叠。
CAT 氯霉素乙酰转移酶(CAT),这个24kDa大小的标签也用作报道基因,与大多数蛋白质融合时依然能保留其活性。这意味着它可以用来直接测量表达水平,而不需要PAGE或免疫检测。
DHFR 二氢叶酸还原酶(DHFR),这个25kDa蛋白质参与胸苷生物合成途径。带有这个标签的蛋白质的纯化可以通过甲氨蝶呤连接的树脂实现。
mCitrine 最早的变体EYFP虽然仍被广泛使用,但由于其pKa值高、对卤化物敏感,导致EYFP的应用还很不理想。单体形式的变体柠檬黄(mCitrine)和维纳斯(mVenus)是目前应用最多的黄色荧光蛋白。
mRuby2 最亮的红色荧光蛋白。
Neo 一般卡那霉素抗性基因编码的是新霉素磷酸转移酶II,基因记做neo,能通过降解G418、新霉素和卡那霉

素来实现真核和原核细胞的相应抗性,这个酶在基因工程中是比较特殊的,既可以在原核生物中表达使大

肠杆菌等表现出卡那霉素抗性,也可以在真核生物中表达使动植物细胞表现出G418抗性。

Puro 嘌呤霉素(puromycin;PM ) 是一种蛋白质合成抑制剂,它具有与tRNA分子末端类似的结构,能够同氨基酸

结合,代替氨酰化的tRNA同核糖体的A位点结合,并掺入到生长的肽链中。虽然嘌呤霉素能够同A位点结

合,但是不能参与随后的任何反应, 因而导致蛋白质合成的终止并释放出C-末端含有嘌呤霉素的不成熟

的多肽,作用是抑制蛋白质合成的延长。

B42,GAL4LexAVP16 这些标签用于酵母双杂交系统中的蛋白质相互作用,可作为DNA结合(GAL4LexA)结构域; 转录激活因子(B42GAL4VP16