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AAV-CRISPR基因编辑

派真生物载体克隆提供基因编辑CRISPR系列载体定制,AAV-CRISPR载体的敲除、修复共分为4种类别,分别是SpCas9/SpCas9HF(A、B系列)、SaCas9/ SaCas9HF(C、D系列)、AAV-CRISPR基因激活(E系列)、NmCas9, AsCpf1, LbCpf1(F、G、H系列),专门用于基因编辑动物体内实验。
客户只需要提供sgRNA靶基因序列和选择派真生物载体库编号,由派真生物进行靶点设计、图谱制作和载体构建,若gRNA未经有效性验证,建议多选择2-3个候选靶点。
如您对我们的 AAV 服务感兴趣,请联系我们免费咨询 或者 提交需求与询价.

SpCas9/SpCas9HF(A、B系列)

SpCas9是第一个被鉴定的CIRSPR核酸酶,其PAM为NGG,PAM序列在基因中出现的频率,大约每8bp出现一次,基因长达4.2Kb(详细介绍请参阅AAV-CRISPR系统,第18页)。派真生物以小于300 bp的EFS(EF1a短版本)启动子或miniCMV启动子(180 bp)驱动SpCas9,使序列总长度不超过 AAV长度限制 5Kb。

特点

  • 使用经过优化的sgRNA scaffold,能提高切割效率约40%SpCas9HF: SpCas9高保真度版本,大大减小脱靶现象,切割活性与野生型相比无显著降低;
  • XA01为SpCas9及sgRNA表达盒处在同一载体的一体化载体。使用比U6启动子更小但活性并无显著减弱的H1启动子(100 bp),因此能将sgRNA的表达盒与SpCas9放入同一载体;
  • XA02为无sgRNA表达盒的单独SpCas9载体,可根据需要置换EFS启动子成410 bp以下的启动子;
  • XA03~XA27为U6-sgRNA表达盒,带有EFS或EF1或CAG启动子驱动的mCherry、Cre、mCherry-2A-Cre、RenillaLuciferase-2A-Cre、ZsGreen、EGFP、EGFP-KASH。

SaCas9/ SaCas9HF(C、D系列)

SaCas9是活性与SpCas9相似的短版本Cas9,基因长度为3.2kb,因为有更严谨的PAM (NNGRRT),PAM序列在基因中出现的频率,大约每32bp中出现一次,靶序列的长度为21nt-23nt,理论上脱靶率比SpCas9更低。

特点

  • 使用了经优化的sgRNA scaffold, 显著提高切割效率;
  • C1/D1为CMV启动子的SaCas9HF与sgRNA表达盒一体化载体;
  • C2/D2/C2XX/D2XX为无sgRNA表达盒的单独SaCas9/SaCas9HF载体,可根据实验设计需要搭配不同的载体使用。

AAV-CRISPR基因激活(E系列)

在14-16 nt的短RNA指导下,野生型SpCas9能结合到靶序列DNA上但不能切割与释放。此时,经过改造加入形成MS2 RNA接头的sgRNA骨架能结合MS2-P65-HSF1 转录激活成分,从而激活下游位置的基因转录。激活基因的转录水平能达1000倍以上。
NmCas9 是跟SpCas9有相似活性的短版本Cas9,基因长度为3.3kb,由于识别更长的PAM(NNNNGATT),PAM序列在基因中出现的频率,大约每128 bp中出现一次,靶序列长度为(21-23 nt),理论脱靶率比SpCas9低得多,AsCpf1、LbCpf1拥有与 CRISPR-Cas9不一样的特性:(1)更短小的sgRNA骨架(2)识别含T量高的5’PAM(3)靶标DNA被切于远离PAM的位置,且产生5个碱基突出的粘末端。
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