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AAV包装 – 科研级

腺相关病毒(AAV)是一种单链DNA病毒,依赖于其他病毒进行复制,比如腺病毒。到目前为止,有超过80%的人口携带AAV,当前科学界的共识是,它不会引起任何人类疾病。 作为动物和细胞实验中最重要的载体之一,重组腺相关病毒(rAAV)可以携带靶基因片段。 rAAV衣壳蛋白中的病毒编码基因组被完全删除,取而代之的是治疗性基因编辑工具。不同血清型rAAV的组织特异性区别,使得科学家能够成功设计高度灵活和特异性的AAV载体,在基础科学研究或临床水平的动物和细胞实验中显示出广阔的前景。 美国FDA批准了通过rAAV递送药物的多种基因疗法,rAAV载体已成为治疗上千种人类疾病的理想递送工具和治疗方法载体。
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派真生物提供的AAV包装服务可根据客户要求提供多种血清型AAV定制包装,以满足客户各种实验需求。 我们通过经典的三质粒系统包装AAV,该方法被证明是有效、灵活、安全的工艺方法。派真生物通过创新的AAV包装工艺,可获得高质量和交付速度的重要保证。

派真生物AAV病毒包装优势

  • 快速: AAV总量5E+13GC以内为6-9个工作日内交付
  • 可靠: 交付滴度≥1E+13GC/m,经进口标准品校正,不担心滴度虚高
  • 放心: AAV纯度95%以上、内毒素<10EU/mL,可选测HPLC、电镜空壳率、支原体、rcAAV、TCID50等几十项指标
  • 周到: 及时响应式AAV专业技术支持服务
  • 免邮: 货物干冰低温运费均由派真生物承担
  • 全面: 提供从载体设计、病毒包装和分析方法学开发一站式服务
  • 价值: 从早期研究、GLP到GMP级AAV样品全价值链覆盖

AAV高效感染与体内递送

作为传递外源基因的有效载体,rAAV已被越来越多的动物研究人员所使用。然而,诸如怎么选择注射部位,应注射多少rAAV载体数量或注射后多长时间检查动物等问题仍待进一步的探讨。由于科研领域和动物模型的差异,很难采取一个适用于所有实验的通用AAV注射方法。客户需要根据自身实际目标探索具体的研究实验。
由于即便相同的AAV血清型在啮齿动物和灵长类动物中也具有不同的感染效力,因此当前对灵长类动物中不同AAV血清型的研究还有待进一步改进。对于只有较少文献报道的组织及相关AAV选择,建议研究人员通过预实验确定理想的血清型,这也是科研领域的热点创新之一。

预实验设计参考

  • 血清型选择:如果您还不清楚哪种血清型最适合您的实验材料,可以尝试3种以上的荧光AAV血清型来做预感染实验。
  • 梯度稀释感染:由于不同基因的长度和表达水平差异,我们强烈建议您在正式实验前,进行3-4AAV梯度剂量注射来检测目的基因表达水平。
  • 实验对照:设置一个具有相同血清型和启动子的GFP阳性对照组
  • 检测时间:通常情况下,AAV注射3-4周后可以检测到表达产物,我们也推荐在4周或更长时间后进行检测。

客户发表文章参考

  1. 通过鼠系统注射AAV2载体研究CRISPR超级阻遏物进行合成免疫调节

Farzaneh Moghadam, Ryan LeGraw, et al. Synthetic immunomodulation with a CRISPR super-repressor in vivo[J]. Nature Cell Biology, 2020. (IF=20.042 派真产品:AAV载体 研究领域:免疫调节 匹兹堡大学药学院匹兹堡肝脏研究中心)

  1. 通过小鼠尾静脉注射AAV9载体,研究miRNA-20b抑制线粒体融合蛋白导致心肌肥大的机制。

Yue Qiu, Chaoqi Liang, Yuan Yao, et al. MicroRNA-20b Promotes Cardiac Hypertrophy by the Inhibition of Mitofusin 2-Mediated Inter-organelle Ca 2+ Cross-Talk[J]. Molecular Therapy, 2020. (IF=7.032 派真产品:rAAV9载体 研究领域:疾病病因 哈尔滨医科大学药学院药理学系)

  1. 通过鼠尾静脉注射AAV6载体增强人造血干细胞转导在基因治疗和编辑的意义

Hua Yang, Wei Wang, et al. Enhanced Transduction of Human HematopoieticStem Cells by AAV6 Vectors: Implicationsin Gene Therapy and Genome Editing[J]. Human Gene Therapy, 2019. (IF=4.273  派真产品:rAAV6载体 研究领域:基因治疗 中南大学湘雅三院细胞与基因治疗所放射科)

AAV体外细胞感染

  • 对于体外培养的细胞,AAV-DJAAV6是最普遍的选择。在常规细胞培养中,AAV-DJ可以感染80%以上的细胞,而AAV6对血液来源细胞具有最强的感染效力。
  • 我们强烈建议您在正式实验前进行梯度浓度感染预实验(至少3-4个梯度,例如MOI=1×10^3,MOI=1×10^4,MOI=1×10^5);此外,无细胞毒性是这类实验的基本需求。
  • 检测时间:通常在感染后2-7天进行检测

我们提供多种AAV技术服务

  • AAV现货:HBV-AAV、CRISPR-AAV、光遗传AAV、Cre重组酶和荧光AAV对照等现货产品,下午230分之前提交的订单将在当日发货,230分后订单将在第二天发货。
  • 客户质粒包装AAV:将质粒(> 20ug)通过5 mL的小试管,或通过清洁滤纸外包上密封膜寄送。从收到质粒之日起,最多需要6-9个工作日进行AAV包装。
  • 载体克隆包装AAV:客户提交想克隆进载体的自定义基因序列,或把含有目的基因序列的质粒寄送,克隆通常需要6-10个工作日完成,引物合成时间另计,然后将构建的质粒做AAV病毒包装提供给客户进行动物体内或细胞实验。

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