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新冠SARS-Cov-2假病毒及突变株

新冠病毒引起的疫情已经在全球造成数千万人感染,SARS-COV-2突刺(Spike)糖蛋白通过结合宿主细胞表面ACE2受体感染宿主,当前新冠病毒在全球已经发生多个突变株,已为全球疫情防控及人类健康带来全新的挑战,对其感染机制及特性的研究需要更加深入。科学家通常需要在BSL-3实验室(P3)条件下操作活新冠病毒进行效价测定或攻毒试验,极大提高了新冠有关的新药研发门槛,由于P3实验室资源非常稀缺,目前仍然处于等候排队的供不应求状态。

S蛋白重组假病毒(Pseudovirus)是一类重组改造反转录病毒,能够整合其他病毒囊膜糖蛋白来形成的具有外源性病毒囊膜,但仍保持着自身基因组特性。S蛋白重组假病毒可以应用于抗体效价检测或中和滴定实验,为广大科学家提供一个模拟新冠病毒作用机制的安全快捷平台。通过构建与新冠病毒有相同感染机制的高滴度的S蛋白重组假病毒,研究者可以在不依赖于BSL-3实验室条件下,迅速建立基于S蛋白重组病毒的高通量筛选平台,或构建一个新冠治疗或预防性药物的药效评价系统,有效助力广大科学研究工作者及新药开发者的研究进度,有利于进行快速安全的实验操作和降低早期研发成本。

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派真生物为SARS-COV-2新冠项目研究者提供高效的S蛋白重组假病毒(Pseudovirus),利用优化的载体设计保留Spike蛋白在假病毒衣壳外的区域(与ACE受体识别并结合),而非全长结构,适用于新冠抗体药物、疫苗筛选和药效研究。派真采用三质粒包装系统制备了早期新冠病毒、英国突变体、D614G突变体、南非突变体、巴西突变体等现货产品,派真生物假病毒产品已成功应用于60多家机构,满足不同方向研究者的实验需求。

我们的优势

  • 感染滴度≥ 5E+6 TU/mL
  • hACE2细胞感染效率高
  • 提供eGFP标记,适于荧光直观分析
  • 无致病性,安全可靠
  • 无需P3/BSL-3实验室,P2/BSL-2环境即可
  • 每批次完整质量检测报告

保存要求

必须保存在-80℃左右,冻融会影响病毒滴度。若从-80℃取出,可放置在4℃或冰上操作,建议24小时使用完毕,若未按上述操作,会导致滴度下降或感染不理想。

生物安全预防措施

Biosafety Level 2 (BSL-2)或P2实验环境

实验操作流程

建议采用贴壁感染ACE2表达丰度比较高的细胞株进行感染实验(例如:派真生物hACE2 293T细胞株),以96孔板为例进行目的细胞感染实验,如有必要可用无血清培养基稀释病毒原液。

  1. 第一天,准备细胞:96孔板接种若干孔细胞,每孔接种约1×104个细胞,每孔培养基体积100ul;进行病毒感染时,细胞融合度大约30-50%。
  2. 第二天,准备病毒并感染细胞:-80°C冰箱取出病毒先在冰上融化或者4°C融化,根据算好加入的病毒量(以派真生物的hACE2 293T细胞为例,每个96孔板细胞加入10-20ul的假病毒)稀释到培养基中,尽可能保证含有假病毒的培养基为最小体积,以获得最佳感染效果;
  3. 更换培养基:一般感染8-20h后将含有病毒的培养液更换为新鲜培养基;感染后注意观察细胞状态,如果假病毒感染对细胞有明显的毒性而影响到细胞状态,则建议在加入病毒4-6h后,更换新鲜培养基。
  4. 感染效率检测:一般感染48-72小时(推荐72小时感染),在倒置荧光显微镜下观察荧光,估计病毒感染目的细胞的效率;

温馨提示:根据感染效率结果,确定最适的假病毒感染用量;再开始正式的药物筛选实验;

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